Desenvolver métodos fiables e estandarizados para avaliar a susceptibilidade dos enxames de mosquitos aos insecticidas é crucial para comprender a eficacia dos novos ingredientes ou formulacións activas. Os métodos para avaliar a susceptibilidade dos enxames de mosquitos aos insecticidas ou produtos de contacto (como os promovidos nos programas de saúde pública) están ben establecidos e estandarizados. Non obstante, os métodos de proba para insecticidas volátiles ou en aerosois utilizados en produtos domésticos son difíciles de implementar de forma eficaz. Baseándonos nas recomendacións da Organización Mundial da Saúde para insecticidas domésticos, desenvolvemos un método estandarizado e de alto rendemento para avaliar produtos en aerosois utilizando mosquitos en gaiola e un método de desinfección eficaz realizado nunha cámara de probas de Peet-Grady (cámara de probas de PG). Validamos a eficacia deste novo método utilizando poboacións de mosquitos Aedes e Anopheles resistentes e susceptibles aos insecticidas. Unha característica novedosa deste método é a inclusión dunha cámara dirixida ás gaiolas de mosquitos, o que permite a avaliación cuantitativa en tempo real das taxas de mortalidade dos mosquitos despois da exposición aos insecticidas. A desinfección con hisopo elimina eficazmente o aceite en aerosol que contén piretroides residual da superficie da cámara de proba, con taxas de mortalidade inferiores ao 2 % para os mosquitos susceptibles analizados directamente na superficie da cámara. Non se observou heteroxeneidade espacial nas taxas de mortalidade ou morte entre os mosquitos en gaiola na cámara de PG. O noso método de dobre gaiola proporciona un rendemento oito veces maior que o método de voo libre, o que permite realizar probas simultáneas con diferentes cepas de mosquitos e discriminar eficazmente entre as poboacións de mosquitos susceptibles e resistentes probadas en paralelo.
Ata a data, os insecticidas en aerosois empregáronse principalmente no fogar para a protección persoal, cun uso limitado en programas de saúde pública. Non obstante, estudos recentes demostraron un uso xeneralizado de insecticidas domésticos en zonas onde prevalecen as enfermidades transmitidas por vectores. Tanto se a motivación é o repelente de mosquitos como a prevención de enfermidades, existe unha necesidade urxente de métodos estandarizados e fáciles de usar para a detección da susceptibilidade das poboacións endémicas de mosquitos aos insecticidas domésticos. Isto é crucial para predicir a eficacia dos insecticidas contra os vectores locais e comprender como o uso de insecticidas domésticos inflúe na selección evolutiva da resistencia aos insecticidas.
O Método suplementario 1 ofrece instrucións detalladas paso a paso para levar a cabo o noso programa de probas de insecticidas en aerosois.
Aínda que as directrices da OMS recomendan o uso de nebulizadores automáticos, non proporcionan especificacións técnicas específicas. O uso de nebulizadores automáticos é crucial, xa que a nebulización manual nunha cámara de propilenglicol non só require moito traballo, senón que tamén pode causar inconsistencias espaciais e variacións na duración da nebulización.
A cámara de reacción debe esterilizarse despois de cada proba, pero o método de limpeza interna recomendado na Guía da OMS implica aplicar auga cunha mangueira. No noso traballo diario, este método é o paso que require máis traballo no funcionamento de equipos bioanalíticos, polo que desenvolvemos e probamos un procedemento de esterilización baseado en hisopos.
As pezas extraíbles do ventilador trátanse como se describe anteriormente e as aspas e o marco do ventilador límpanse cunha esponxa empapada nunha solución ao 5 % de Decon 90.
Baseándose na relación entre a duración da pulverización e a taxa de subministración do produto, o noso dispensador de aerosois tamén demostrou unha boa precisión no control da proporción de dosificación do aerosol, polo menos no rango probado de 1 a 4 veces. Como se mostra na figura 3b, esta característica é particularmente importante para caracterizar a relación dose-resposta de novas formulacións de aerosois ou determinar a dose de identificación para detectar a resistencia aos insecticidas.
Demostramos que o noso protocolo revisado para a avaliación de insecticidas en aerosois domésticos, mediante desinfección con hisopos, gaiolas dobres, pulverizadores controlados remotamente e gravación biométrica de cámaras de acción, é unha alternativa máis eficaz e viable ao actual.OMSrecomendacións. O método de desinfección con hisopo, que só require 20 minutos, aforra tempo significativamente en comparación co protocolo existente (que normalmente require unha hora por cámara de ensaio). Tamén reduce o tempo que os operadores dedican a colocarse o equipo de protección individual completo (por exemplo, cascos respiratorios e roupa de traballo antiestática). Ademais, este método xera menos líquido e roupa contaminados para o tratamento que unha limpeza completa da cámara de ensaio, minimizando así o potencial de contaminación da sala que a alberga. O método de desinfección con hisopo tamén é axeitado para a desinfección de salas de ensaio semipermanentes que requirenmínimoColocación de mobles en diferentes distribucións de habitacións.
Unha cuestión clave explorada neste estudo e noutros é a estandarización das doses de exposición aos insecticidas aplicados no medio ambiente en diferentes protocolos de proba. Como se mostra na Figura 2b, a pesar dunha duración fixa da pulverización, o volume da pulverización variou entre os tipos de aerosol, o que podería reflectir diferenzas nos procesos de fabricación (por exemplo, presión interna, uso de propelente, estrutura da boquilla, etc.). Ademais, a actual falta de dispositivos de pulverización remota dispoñibles comercialmente coa flexibilidade necesaria na duración da pulverización limita o seu uso na avaliación da relación dose-resposta para o control de mosquitos. A pulverización manual a través de escotillas de proba ou escotillas de acceso (se están dispoñibles) pode levar a variacións nas doses de exposición. De feito, os nosos resultados destacan a necesidade e a importancia de reducir estas fontes de variación. Para as poboacións resistentes de Aedes aegypti, observamos unha correlación entre a dose de aerosol e a determinación final da susceptibilidade ou resistencia (Figura 3b). Idealmente, as doses de aerosol deberían estandarizarse en gramos de substancia aerosolizada en lugar de na duración da aerosolización para facilitar as comparacións entre diferentes estudos.
O RCAD ofrece unha alternativa para futuras investigacións que minimiza o impacto das variacións no proceso. Aínda que descubrimos que a estandarización dos aerosois non é viable, demostramos que a masa de aerosois administrada a través de diferentes latas de aerosois pódese estimar reproduciblemente calibrando a lonxitude da pulverización (Figuras 2b, 3a). Esta estandarización da concentración de aerosois en calquera cámara de proba é crucial para mellorar a reproducibilidade dos resultados.
Baseándonos na nosa experiencia e na doutros grupos de investigación, as recomendacións contidas na actual Guía sobre o uso de métodos de detección de aerosois para analizar mosquitos de voo libre supoñen importantes desafíos loxísticos para os estudos de laboratorio e semicampo. Por exemplo, os métodos de detección de mosquitos de voo libre teñen un rendemento moi baixo (incluída a recaptura de mosquitos de voo libre superviventes, que require moita man de obra) e padecen unha serie de limitacións técnicas, como as dificultades para determinar as taxas de mortalidade en tempo real.
Aínda que o noso experimento validado de dobre gaiola aborda a cuestión das limitacións de fluxo e é un método viable para a detección da susceptibilidade dos mosquitos aos insecticidas en aerosois, cómpre sinalar que as taxas de mortalidade dos mosquitos das Illas Caimán foron significativamente máis baixas no experimento da gaiola que no experimento de voo libre (Fig. 5c, Táboa 1). Esta diferenza pode reflectir unha redución na dose de insecticida dentro da gaiola, xa que menos pingas de aerosois penetran na malla e entran na gaiola. Estudos futuros poderían usar tecidos de malla máis grande e deseños de gaiolas con taxas de fluxo de aire de ventilador máis altas (por exemplo, deseños cilíndricos) para validar aínda máis os resultados obtidos cos diferentes métodos experimentais.
Data de publicación: 02-02-2026