Nun proxecto anterior no que se probaron plantas locais de procesamento de alimentos para detectar mosquitos en Tailandia, descubriuse que os aceites esenciais (AE) de Cyperus rotundus, galangal e canela tiñan unha boa actividade antimosquitos contra o *Aedes aegypti*. Nun intento de reducir o uso de produtos tradicionaisinsecticidase mellorar o control das poboacións de mosquitos resistentes, este estudo tivo como obxectivo identificar o posible sinerxismo entre os efectos adulticidas do óxido de etileno e a toxicidade da permetrina para os mosquitos Aedes aegypti, incluídas as cepas resistentes e sensibles aos piretroides.
Avaliar a composición química e a actividade letal do EO extraído de rizomas de C. rotundus e A. galanga e cortiza de C. verum contra a cepa susceptible Muang Chiang Mai (MCM-S) e a cepa resistente Pang Mai Dang (PMD-R). ) Adultos activos de Ae. Aedes aegypti. Tamén se realizou un bioensaio en adultos da mestura EO-permetrina nestes mosquitos Aedes aegypti para comprender a súa actividade sinérxica. cepas de Aedes aegypti.
A caracterización química mediante o método analítico GC-MS mostrou que se identificaron 48 compostos a partir dos aceites esenciales de C. rotundus, A. galanga e C. verum, que representan o 80,22 %, 86,75 % e 97,24 % do total de compoñentes, respectivamente. O cipereno (14,04 %), o β-bisaboleno (18,27 %) e o cinamaldehido (64,66 %) son os principais compoñentes do aceite de ciperus, o aceite de galangal e o aceite balsámico, respectivamente. Nos ensaios biolóxicos de matanza de adultos, os VE de C. rotundus, A. galanga e C. verum foron eficaces para matar Ae. aegypti. Os valores DL50 de MCM-S e PMD-R foron de 10,05 e 9,57 μg/mg para femias, 7,97 e 7,94 μg/mg para femias e 3,30 e 3,22 μg/mg para femias, respectivamente. A eficiencia de MCM-S e PMD-R Ae na eliminación de adultos *. aegypti* nestes AE foi próxima á do butóxido de piperonilo (valores de PBO, DL50 = 6,30 e 4,79 μg/mg de femias, respectivamente), pero non tan pronunciada como a da permetrina (valores de DL50 = 0,44 e 3,70 ng/mg de femias respectivamente). Non obstante, os bioensaios combinados atoparon sinerxía entre o AE e a permetrina. Observouse sinerxía significativa coa permetrina contra dúas cepas de mosquitos *Aedes*. Observouse *Aedes aegypti* no microorganismo de microorganismos (EM) de *C. rotundus* e *A. galanga*. A adición de aceites de *C. rotundus* e *A. galanga* reduciu significativamente os valores de DL50 da permetrina en MCM-S de 0,44 a 0,07 ng/mg e 0,11 ng/mg en femias, respectivamente, con valores de relación de sinerxía (SR) de 6,28 e 4,00 respectivamente. Ademais, os aceites esenciais de *C. rotundus* e *A. galanga* tamén reduciron significativamente os valores de DL50 da permetrina en PMD-R de 3,70 a 0,42 ng/mg e 0,003 ng/mg en femias, respectivamente, con valores de SR de 8,81 e 1233,33, respectivamente.
Efecto sinérxico dunha combinación de EO-permetrina para mellorar a toxicidade en adultos contra dúas cepas de mosquitos Aedes. Aedes aegypti demostra un papel prometedor para o óxido de etileno como sinérxico na mellora da eficacia antimosquitos, especialmente cando os compostos tradicionais son ineficaces ou inapropiados.
O mosquito Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) é o principal vector da febre do dengue e outras enfermidades víricas infecciosas como a febre amarela, a chikungunya e o virus Zika, o que supón unha ameaza enorme e persistente para os humanos [1, 2]. O virus do dengue é a febre hemorráxica patóxena máis grave que afecta aos humanos, cun estimado de 5 a 100 millóns de casos anuais e máis de 2.500 millóns de persoas en risco en todo o mundo [3]. Os brotes desta enfermidade infecciosa supoñen unha enorme carga para as poboacións, os sistemas sanitarios e as economías da maioría dos países tropicais [1]. Segundo o Ministerio de Sanidade tailandés, en 2015 rexistráronse 142.925 casos de dengue e 141 mortes en todo o país, máis do triplo do número de casos e mortes en 2014 [4]. A pesar das probas históricas, o mosquito Aedes erradicou ou reduciu considerablemente a febre do dengue. Tras o control do Aedes aegypti [5], as taxas de infección aumentaron drasticamente e a enfermidade estendeuse por todo o mundo, debido en parte a décadas de quecemento global. A eliminación e o control do *Aedes aegypti* son relativamente difíciles porque se trata dun mosquito vector doméstico que se aparea, alimenta, descansa e pon ovos dentro e arredor das vivendas humanas durante o día. Ademais, este mosquito ten a capacidade de adaptarse aos cambios ou perturbacións ambientais causadas por eventos naturais (como a seca) ou medidas de control humanas, e pode volver ao seu número orixinal [6, 7]. Dado que as vacinas contra a febre do dengue foron aprobadas recentemente e non existe un tratamento específico para a febre do dengue, a prevención e a redución do risco de transmisión do dengue depende enteiramente do control dos mosquitos vectores e da eliminación do contacto humano cos vectores.
En particular, o uso de produtos químicos para o control de mosquitos xoga agora un papel importante na saúde pública como un compoñente importante da xestión integral integrada de vectores. Os métodos químicos máis populares inclúen o uso de insecticidas de baixa toxicidade que actúan contra as larvas de mosquitos (larvicidas) e os mosquitos adultos (adidocidas). O control larvario mediante a redución da fonte e o uso regular de larvicidas químicos como organofosforados e reguladores do crecemento de insectos considérase importante. Non obstante, os impactos ambientais adversos asociados aos pesticidas sintéticos e o seu mantemento complexo e laborioso seguen sendo unha preocupación importante [8, 9]. O control activo tradicional de vectores, como o control de adultos, segue sendo o medio de control máis eficaz durante os brotes virais porque pode erradicar os vectores de enfermidades infecciosas rapidamente e a grande escala, así como reducir a vida útil e a lonxevidade das poboacións de vectores locais [3], 10]. Catro clases de insecticidas químicos: organoclorados (denominados só DDT), organofosforados, carbamatos e piretroides constitúen a base dos programas de control de vectores, sendo os piretroides a clase máis exitosa. Son moi eficaces contra varios artrópodos e teñen baixa efectividade. toxicidade para os mamíferos. Na actualidade, os piretroides sintéticos constitúen a maioría dos pesticidas comerciais, representando arredor do 25 % do mercado mundial de pesticidas [11, 12]. A permetrina e a deltametrina son insecticidas piretroides de amplo espectro que se levan décadas empregando en todo o mundo para controlar diversas pragas de importancia agrícola e médica [13, 14]. Na década de 1950, o DDT foi seleccionado como o produto químico de elección para o programa nacional de control de mosquitos de saúde pública de Tailandia. Tras o uso xeneralizado do DDT en zonas endémicas da malaria, Tailandia foi eliminando gradualmente o uso do DDT entre 1995 e 2000 e substituíuno por dous piretroides: a permetrina e a deltametrina [15, 16]. Estes insecticidas piretroides introducíronse a principios da década de 1990 para controlar a malaria e o dengue, principalmente mediante tratamentos con mosquiteiras e o uso de néboas térmicas e aerosois de toxicidade ultrabaxa [14, 17]. Non obstante, perderon eficacia debido á forte resistencia dos mosquitos e á falta de cumprimento público debido ás preocupacións sobre a saúde pública e o impacto ambiental dos produtos químicos sintéticos. Isto supón desafíos significativos para o éxito dos programas de control de vectores de ameazas [14, 18, 19]. Para que a estratexia sexa máis eficaz, son necesarias contramedidas oportunas e axeitadas. Os procedementos de xestión recomendados inclúen a substitución de substancias naturais, a rotación de produtos químicos de diferentes clases, a adición de sinérxicos e a mestura de produtos químicos ou a aplicación simultánea de produtos químicos de diferentes clases [14, 20, 21]. Polo tanto, existe unha necesidade urxente de atopar e desenvolver unha alternativa e un sinérxico respectuosos co medio ambiente, cómodos e eficaces, e este estudo ten como obxectivo abordar esta necesidade.
Os insecticidas de orixe natural, especialmente os baseados en compoñentes vexetais, demostraron potencial na avaliación de alternativas actuais e futuras para o control de mosquitos [22, 23, 24]. Varios estudos demostraron que é posible controlar importantes vectores de mosquitos mediante o uso de produtos vexetais, especialmente aceites esenciais (AE), como insecticidas adultos. Atopáronse propiedades adulticidas contra algunhas especies importantes de mosquitos en moitos aceites vexetais como o apio, o comiño, a zedoaria, o anís, a pementa da pipa, o tomiño, a *Schinus terebinthifolia*, a *Cymbopogon citratus*, a *Cymbopogon schoenanthus*, a *Cymbopogon giganteus*, a *Chenopodium ambrosioides*, a *Cochlospermum planchonii*, a *Eucalyptus ter eticornis*, a *Eucalyptus citriodora*, a *Cananga odorata* e o *Petroselinum criscum* [25, 26, 27, 28, 29, 30]. O óxido de etileno úsase agora non só por si só, senón tamén en combinación con substancias vexetais extraídas ou pesticidas sintéticos existentes, producindo diferentes graos de toxicidade. As combinacións de insecticidas tradicionais como organofosfatos, carbamatos e piretroides con óxido de etileno/extractos de plantas actúan de forma sinerxética ou antagonista nos seus efectos tóxicos e demostrouse que son eficaces contra vectores de enfermidades e pragas [31,32,33,34,35]. Non obstante, a maioría dos estudos sobre os efectos tóxicos sinérxicos das combinacións de fitoquímicos con ou sen produtos químicos sintéticos realizáronse en insectos vectores e pragas agrícolas en lugar de en mosquitos de importancia médica. Ademais, a maior parte do traballo sobre os efectos sinérxicos das combinacións de insecticidas sintéticos vexetais contra os vectores de mosquitos centrouse no efecto larvicida.
Nun estudo previo realizado polos autores como parte dun proxecto de investigación en curso que analizaba intimicidas de plantas alimentarias autóctonas de Tailandia, descubriuse que os óxidos de etileno de *Cyperus rotundus*, *galangal* e *canela* tiñan potencial de actividade contra os mosquitos adultos *Aedes aegypti* [36]. Polo tanto, este estudo tivo como obxectivo avaliar a eficacia dos aceites esenciais illados destas plantas medicinais contra os mosquitos *Aedes aegypti*, incluíndo cepas resistentes e sensibles aos piretroides. Tamén se analizou o efecto sinérxico de mesturas binarias de óxido de etileno e piretroides sintéticos con boa eficacia en adultos para reducir o uso de insecticidas tradicionais e aumentar a resistencia aos vectores de mosquitos, especialmente contra *Aedes aegypti*. Este artigo informa da caracterización química de aceites esenciais eficaces e o seu potencial para aumentar a toxicidade da permetrina sintética contra os mosquitos *Aedes aegypti* en cepas sensibles aos piretroides (MCM-S) e cepas resistentes (PMD-R).
Os rizomas de C. rotundus e A. galanga e a cortiza de C. verum (Fig. 1) empregados para a extracción de aceites esenciais foron adquiridos a provedores de plantas medicinais na provincia de Chiang Mai, Tailandia. A identificación científica destas plantas conseguiuse mediante consultas co Sr. James Franklin Maxwell, botánico de herbarios do Departamento de Bioloxía da Facultade de Ciencias da Universidade de Chiang Mai (CMU), provincia de Chiang Mai, Tailandia, e o científico Wannari Charoensap; no Departamento de Farmacia da Facultade de Farmacia da Universidade Carnegie Mellon, a Sra. Voucher almacénanse espécimes de cada planta no Departamento de Parasitoloxía da Facultade de Medicina da Universidade Carnegie Mellon para o seu uso futuro.
As mostras de plantas secáronse individualmente á sombra durante 3-5 días nun espazo aberto con ventilación activa e unha temperatura ambiente de aproximadamente 30 ± 5 °C para eliminar o contido de humidade antes da extracción dos aceites esenciais (AE) naturais. Un total de 250 g de cada material vexetal seco moeuse mecanicamente ata obter un po groso e utilizouse para illar aceites esenciais (AE) mediante destilación ao vapor. O aparello de destilación constaba dunha manta de quecemento eléctrica, un matraz de fondo redondo de 3000 mL, unha columna de extracción, un condensador e un dispositivo Cool Ace (Eyela Cool Ace CA-1112 CE, Tokyo Rikakikai Co. Ltd., Toquio, Xapón). Engadir 1600 ml de auga destilada e 10-15 esferas de vidro ao matraz e despois quentar a aproximadamente 100 °C usando un quentador eléctrico durante polo menos 3 horas ata que se complete a destilación e non se produza máis AE. A capa de EO separouse da fase acuosa usando un funil de separación, secouse sobre sulfato de sodio anhidro (Na2SO4) e almacenouse nunha botella marrón selada a 4 °C ata que se examinaron a composición química e a actividade adulta.
A composición química dos aceites esenciais realizouse simultaneamente co bioensaio para a substancia adulta. A análise cualitativa realizouse empregando un sistema GC-MS que constaba dun cromatógrafo de gases Hewlett-Packard (Wilmington, CA, EUA) 7890A equipado cun detector selectivo de masas de cuadrupolo único (Agilent Technologies, Wilmington, CA, EUA) e un MSD 5975C (EI). (Agilent Technologies).
Columna cromatográfica: DB-5MS (30 m × DI 0,25 mm × grosor da película 0,25 µm). O tempo total de execución de GC-MS foi de 20 minutos. As condicións de análise son que as temperaturas do inxector e da liña de transferencia sexan de 250 e 280 °C, respectivamente; a temperatura do forno está configurada para aumentar de 50 °C a 250 °C a unha velocidade de 10 °C/min, o gas portador é helio; caudal de 1,0 ml/min; volume de inxección de 0,2 µL (1/10 % por volume en CH2Cl2, proporción de división 100:1); para a detección de GC-MS utilízase un sistema de ionización electrónica cunha enerxía de ionización de 70 eV. O rango de adquisición é de 50 a 550 unidades de masa atómica (amu) e a velocidade de dixitalización é de 2,91 dixitalizacións por segundo. As porcentaxes relativas dos compoñentes exprésanse como porcentaxes normalizadas pola área do pico. A identificación dos ingredientes de EO baséase no seu índice de retención (IR). O IR calculouse empregando a ecuación de Van den Dool e Kratz [37] para a serie de n-alcanos (C8-C40) e comparouse cos índices de retención da literatura [38] e das bases de datos de bibliotecas (NIST 2008 e Wiley 8NO8). A identidade dos compostos mostrados, como a estrutura e a fórmula molecular, confirmouse mediante comparación con mostras auténticas dispoñibles.
Os estándares analíticos para a permetrina sintética e o butóxido de piperonilo (PBO, control positivo en estudos de sinerxía) foron adquiridos a Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, EUA). Os kits de probas para adultos da Organización Mundial da Saúde (OMS) e as doses diagnósticas de papel impregnado en permetrina (0,75 %) foron adquiridos comercialmente no Centro de Control de Vectores da OMS en Penang, Malaisia. Todos os demais produtos químicos e reactivos utilizados foron de grao analítico e foron adquiridos a institucións locais da provincia de Chiang Mai, Tailandia.
Os mosquitos empregados como organismos de proba no bioensaio de adultos eran mosquitos Aedes aegypti de laboratorio que se apareaban libremente, incluíndo a cepa susceptible de Muang Chiang Mai (MCM-S) e a cepa resistente de Pang Mai Dang (PMD-R). A cepa MCM-S obtívose de mostras locais recollidas na zona de Muang Chiang Mai, provincia de Chiang Mai, Tailandia, e mantívose na sala de entomoloxía do Departamento de Parasitoloxía da Facultade de Medicina da CMU, desde 1995 [39]. A cepa PMD-R, que se descubriu que era resistente á permetrina, illouse de mosquitos de campo recollidos orixinalmente en Ban Pang Mai Dang, distrito de Mae Tang, provincia de Chiang Mai, Tailandia, e mantívose no mesmo instituto desde 1997 [40]. As cepas PMD-R cultiváronse baixo presión selectiva para manter os niveis de resistencia mediante a exposición intermitente a permetrina ao 0,75 % utilizando o kit de detección da OMS con algunhas modificacións [41]. Cada cepa de Ae. O *Aedes aegypti* foi colonizado individualmente nun laboratorio libre de patóxenos a 25 ± 2 °C e unha humidade relativa do 80 ± 10 % e un fotoperíodo de luz/escuridade de 14:10 h. Mantivéronse aproximadamente 200 larvas en bandexas de plástico (33 cm de longo, 28 cm de ancho e 9 cm de alto) cheas de auga da billa cunha densidade de 150-200 larvas por bandexa e alimentáronse dúas veces ao día con galletas para cans esterilizadas. Os vermes adultos mantivéronse en gaiolas húmidas e alimentáronse continuamente cunha solución acuosa de sacarosa ao 10 % e unha solución de xarope multivitamínico ao 10 %. As femias de mosquito chupan sangue regularmente para poñer ovos. As femias de dous a cinco días de idade que non foron alimentadas con sangue pódense usar continuamente en ensaios biolóxicos experimentais en adultos.
Realizouse un bioensaio de resposta á dose-mortalidade de EO en mosquitos Aedes aegypti femias adultas, MCM-S e PMD-R empregando un método tópico modificado segundo o protocolo estándar da OMS para probas de susceptibilidade [42]. O EO de cada planta diluíuse en serie cun disolvente axeitado (por exemplo, etanol ou acetona) para obter unha serie graduada de 4-6 concentracións. Despois da anestesia con dióxido de carbono (CO2), os mosquitos pesáronse individualmente. Os mosquitos anestesiados mantivéronse inmóbiles sobre papel de filtro seco nunha placa fría personalizada baixo un estereomicroscopio para evitar a reactivación durante o procedemento. Para cada tratamento, aplicáronse 0,1 μl de solución de EO ao pronoto superior da femia empregando un microdispensador portátil Hamilton (700 Series Microliter™, Hamilton Company, Reno, NV, EUA). Tratáronse vinte e cinco femias con cada concentración, cunha mortalidade que oscilaba entre o 10 % e o 95 % para polo menos 4 concentracións diferentes. Os mosquitos tratados con disolvente serviron como control. Para evitar a contaminación das mostras de proba, substitúese o papel de filtro por un novo para cada OE analizado. As doses utilizadas nestes bioensaios exprésanse en microgramos de OE por miligramo de peso corporal das femias vivas. A actividade do PBO adulto tamén se avaliou de xeito similar ao OE, co PBO utilizado como control positivo en experimentos sinérxicos. Os mosquitos tratados en todos os grupos colocáronse en vasos de plástico e déronlles sacarosa ao 10 % máis xarope multivitamínico ao 10 %. Todos os bioensaios realizáronse a 25 ± 2 °C e humidade relativa do 80 ± 10 % e repetíronse catro veces cos controis. A mortalidade durante o período de cría de 24 horas comprobouse e confirmouse pola falta de resposta do mosquito á estimulación mecánica e logo rexistrouse en función da media de catro réplicas. Os tratamentos experimentais repetíronse catro veces para cada mostra de proba utilizando diferentes lotes de mosquitos. Os resultados resumíronse e utilizáronse para calcular a porcentaxe de taxa de mortalidade, que se utilizou para determinar a dose letal ás 24 horas mediante análise probit.
O efecto anticecida sinérxico do OE e a permetrina avaliouse mediante un procedemento de ensaio de toxicidade local [42], como se describiu anteriormente. Empregouse acetona ou etanol como solvente para preparar a permetrina á concentración desexada, así como unha mestura binaria de OE e permetrina (OE-permetrina: permetrina mesturada con OE a unha concentración DL25). Avaliáronse os kits de proba (permetrina e OE-permetrina) fronte ás cepas MCM-S e PMD-R de *Ae. Aedes aegypti*. A cada unha das 25 femias de mosquito déronlle catro doses de permetrina para comprobar a súa eficacia na morte de adultos, repetindo cada tratamento catro veces. Para identificar os candidatos sinérxicos de OE, administráronse de 4 a 6 doses de OE-permetrina a cada unha das 25 femias de mosquito, repetindo cada aplicación catro veces. O tratamento con PBO-permetrina (permetrina mesturada con concentración DL25 de PBO) tamén serviu como control positivo. As doses empregadas nestes bioensaios exprésanse en nanogramos de mostra de ensaio por miligramo de peso corporal de femia viva. Realizáronse catro avaliacións experimentais para cada cepa de mosquito en lotes criados individualmente, e os datos de mortalidade agrupáronse e analizáronse mediante Probit para determinar unha dose letal de 24 horas.
A taxa de mortalidade axustouse usando a fórmula de Abbott [43]. Os datos axustados analizáronse mediante análise de regresión Probit usando o programa estatístico informático SPSS (versión 19.0). Os valores letais do 25 %, 50 %, 90 %, 95 % e 99 % (DL25, DL50, DL90, DL95 e DL99, respectivamente) calculáronse usando os intervalos de confianza do 95 % correspondentes (IC do 95 %). As medicións de significancia e as diferenzas entre as mostras de proba avaliáronse usando a proba de chi ao cadrado ou a proba U de Mann-Whitney dentro de cada ensaio biolóxico. Os resultados consideráronse estatisticamente significativos a P< 0,05. O coeficiente de resistencia (RR) estímase no nivel DL50 usando a seguinte fórmula [12]:
RR > 1 indica resistencia e RR ≤ 1 indica sensibilidade. O valor da razón de sinerxía (SR) de cada candidato a sinérxico calcúlase do seguinte xeito [34, 35, 44]:
Este factor divide os resultados en tres categorías: un valor SR de 1 ± 0,05 considérase que non ten efecto aparente, un valor SR de > 1,05 considérase que ten un efecto sinérxico e un valor SR de aceite líquido amarelo claro pódese obter por destilación ao vapor dos rizomas de C. rotundus e A. galanga e da cortiza de C. verum. Os rendementos calculados en peso seco foron do 0,15 %, 0,27 % (p/p) e 0,54 % (v/v). p) respectivamente (Táboa 1). O estudo de GC-MS da composición química dos aceites de C. rotundus, A. galanga e C. verum mostrou a presenza de 19, 17 e 21 compostos, que representaron o 80,22, 86,75 e 97,24 % de todos os compoñentes, respectivamente (Táboa 2). Os compostos do aceite de rizoma de C. lucidum constan principalmente de ciperoneno (14,04%), seguido de carraleno (9,57%), α-capselan (7,97%) e α-capselan (7,53%). O principal compoñente químico do aceite de rizoma de galangal é o β-bisaboleno (18,27%), seguido de α-bergamoteno (16,28%), 1,8-cineol (10,17%) e piperonol (10,09%). Mentres que o cinamaldehído (64,66%) se identificou como o compoñente principal do aceite de cortiza de C. verum, o acetato cinámico (6,61%), o α-copaeno (5,83%) e o 3-fenilpropionaldehído (4,09%) consideráronse ingredientes minoritarios. As estruturas químicas do ciperone, β-bisaboleno e cinamaldehído son os principais compostos de C. rotundus, A. galanga e C. verum, respectivamente, como se mostra na Figura 2.
Os resultados de tres OO que avaliaron a actividade dos adultos contra os mosquitos Aedes aegypti móstranse na Táboa 3. Descubriuse que todos os OO teñen efectos letais sobre os mosquitos Aedes MCM-S en diferentes tipos e doses. O OO máis eficaz é C. verum, seguido de A. galanga e C. rotundus con valores de DL50 de 3,30, 7,97 e 10,05 μg/mg de MCM-S en femias respectivamente, lixeiramente superiores a 3,22 (U = 1), Z = -0,775, P = 0,667), 7,94 (U = 2, Z = 0, P = 1) e 9,57 (U = 0, Z = -1,549, P = 0,333) μg/mg de PMD-R en mulleres. Isto corresponde a que o PBO ten un efecto adulto lixeiramente maior sobre o PMD-R que a cepa MSM-S, con valores de DL50 de 4,79 e 6,30 μg/mg en femias, respectivamente (U = 0, Z = -2,021, P = 0,057). Pódese calcular que os valores de DL50 de C. verum, A. galanga, C. rotundus e PBO contra o PMD-R son aproximadamente 0,98, 0,99, 0,95 e 0,76 veces menores que os contra o MCM-S, respectivamente. Polo tanto, isto indica que a susceptibilidade ao PBO e ao EO é relativamente similar entre as dúas cepas de Aedes. Aínda que o PMD-R foi máis susceptible que o MCM-S, a sensibilidade de Aedes aegypti non foi significativa. Pola contra, as dúas cepas de Aedes aegypti diferiron moito na súa sensibilidade á permetrina (Táboa 4). O PMD-R demostrou unha resistencia significativa á permetrina (valor DL50 = 0,44 ng/mg en mulleres) cun valor DL50 máis alto de 3,70 en comparación co MCM-S (valor DL50 = 0,44 ng/mg en mulleres) ng/mg en mulleres (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029). Aínda que o PMD-R é moito menos sensible á permetrina que o MCM-S, a súa sensibilidade ao PBO e aos aceites de C. verum, A. galanga e C. rotundus é lixeiramente maior que a do MCM-S.
Como se observou no bioensaio da poboación adulta da combinación EO-permetrina, as mesturas binarias de permetrina e EO (DL25) mostraron sinerxía (valor SR > 1,05) ou ningún efecto (valor SR = 1 ± 0,05). Efectos complexos en adultos dunha mestura de EO-permetrina en mosquitos albinos experimentais. As cepas MCM-S e PMD-R de Aedes aegypti móstranse na Táboa 4 e na Figura 3. Descubriuse que a adición de aceite de C. verum reducía lixeiramente a DL50 da permetrina contra o MCM-S e aumentaba lixeiramente a DL50 contra o PMD-R a 0,44–0,42 ng/mg en mulleres e de 3,70 a 3,85 ng/mg en mulleres, respectivamente. En contraste, a adición de aceites de C. rotundus e A. galanga reduciu significativamente a DL50 da permetrina en MCM-S de 0,44 a 0,07 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) e a 0,11 (U = 0). Z) = -2,309, P = 0,029) ng/mg en mulleres. Baseándose nos valores de DL50 de MCM-S, os valores de SR da mestura EO-permetrina despois da adición de aceites de C. rotundus e A. galanga foron de 6,28 e 4,00, respectivamente. En consecuencia, a DL50 da permetrina contra o PMD-R diminuíu significativamente de 3,70 a 0,42 (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) e a 0,003 coa adición de aceites de C. rotundus e A. galanga (U = 0, Z = -2,337, P = 0,029) ng/mg femia. O valor de SR da permetrina combinada con C. rotundus contra o PMD-R foi de 8,81, mentres que o valor de SR da mestura de galangal e permetrina foi de 1233,33. En relación co MCM-S, o valor DL50 do PBO de control positivo diminuíu de 0,44 a 0,26 ng/mg (femias) e de 3,70 ng/mg (femias) a 0,65 ng/mg (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029) e do PMD-R (U = 0, Z = -2,309, P = 0,029). Os valores SR da mestura PBO-permetrina para as cepas MCM-S e PMD-R foron de 1,69 e 5,69, respectivamente. Estes resultados indican que os aceites de C. rotundus e A. galanga e o PBO aumentan a toxicidade da permetrina en maior medida que o aceite de C. verum para as cepas MCM-S e PMD-R.
Actividade en adultos (DL50) de EO, PBO, permetrina (PE) e as súas combinacións contra cepas sensibles aos piretroides (MCM-S) e resistentes (PMD-R) de mosquitos Aedes. Aedes aegypti
[45]. Os piretroides sintéticos utilízanse en todo o mundo para controlar case todos os artrópodos de importancia agrícola e médica. Non obstante, debido ás consecuencias nocivas do uso de insecticidas sintéticos, especialmente en termos do desenvolvemento e a resistencia xeneralizada dos mosquitos, así como o impacto na saúde a longo prazo e no medio ambiente, agora existe unha necesidade urxente de reducir o uso de insecticidas sintéticos tradicionais e desenvolver alternativas [35, 46, 47]. Ademais de protexer o medio ambiente e a saúde humana, as vantaxes dos insecticidas botánicos inclúen unha alta selectividade, dispoñibilidade global e facilidade de produción e uso, o que os fai máis atractivos para o control de mosquitos [32, 48, 49]. Este estudo, ademais de dilucidar as características químicas dos aceites esenciais eficaces mediante análise GC-MS, tamén avaliou a potencia dos aceites esenciais adultos e a súa capacidade para aumentar a toxicidade da permetrina sintética *Aegypti* en cepas sensibles aos piretroides (MCM-S) e cepas resistentes (PMD-R).
A caracterización por GC-MS mostrou que o cipern (14,04 %), o β-bisaboleno (18,27 %) e o cinamaldehido (64,66 %) eran os principais compoñentes dos aceites de C. rotundus, A. galanga e C. verum, respectivamente. Estes produtos químicos demostraron diversas actividades biolóxicas. Ahn et al. [50] informaron de que o 6-acetoxicipereno, illado do rizoma de C. rotundus, actúa como un composto antitumoral e pode inducir a apoptose dependente de caspases en células de cancro de ovario. O β-bisaboleno, extraído do aceite esencial da árbore da mirra, presenta citotoxicidade específica contra as células tumorais mamarias humanas e de rato tanto in vitro como in vivo [51]. Informouse de que o cinamaldehido, obtido a partir de extractos naturais ou sintetizado no laboratorio, ten actividades insecticidas, antibacterianas, antifúnxicas, antiinflamatorias, inmunomoduladoras, anticanceríxenas e antianxioxénicas [52].
Os resultados do bioensaio de actividade dependente da dose en adultos mostraron un bo potencial dos AE probados e mostraron que as cepas do mosquito Aedes MCM-S e PMD-R tiñan unha susceptibilidade similar ao AE e ao PBO. Aedes aegypti. Unha comparación da eficacia do AE e a permetrina mostrou que esta última ten un efecto alergicida máis forte: os valores de DL50 son de 0,44 e 3,70 ng/mg en femias para as cepas MCM-S e PMD-R, respectivamente. Estes achados están respaldados por moitos estudos que mostran que os pesticidas naturais, especialmente os produtos derivados de plantas, son xeralmente menos eficaces que as substancias sintéticas [31, 34, 35, 53, 54]. Isto pode deberse a que o primeiro é unha combinación complexa de ingredientes activos ou inactivos, mentres que o segundo é un único composto activo purificado. Non obstante, a diversidade e complexidade dos ingredientes activos naturais con diferentes mecanismos de acción poden mellorar a actividade biolóxica ou dificultar o desenvolvemento de resistencia nas poboacións hóspedes [55, 56, 57]. Moitos investigadores informaron do potencial antimosquito de C. verum, A. galanga e C. rotundus e os seus compoñentes como o β-bisaboleno, o cinamaldehído e o 1,8-cineol [22, 36, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64]. Non obstante, unha revisión da literatura revelou que non houbo informes previos do seu efecto sinérxico coa permetrina ou outros insecticidas sintéticos contra os mosquitos Aedes. Aedes aegypti.
Neste estudo, observáronse diferenzas significativas na susceptibilidade á permetrina entre as dúas cepas de *Aedes* aegypti. O MCM-S é sensible á permetrina, mentres que o PMD-R é moito menos sensible a ela, cunha taxa de resistencia de 8,41. En comparación coa sensibilidade do MCM-S, o PMD-R é menos sensible á permetrina pero máis sensible ao aceite de oliva, o que proporciona unha base para futuros estudos destinados a aumentar a eficacia da permetrina combinándoa co aceite de oliva. Un bioensaio baseado en combinacións sinérxicas para os efectos en adultos mostrou que as mesturas binarias de aceite de oliva e permetrina reducían ou aumentaban a mortalidade dos adultos de *Aedes* aegypti. A adición de aceite de *C. verum* diminuíu lixeiramente a DL50 da permetrina contra o MCM-S pero aumentou lixeiramente a DL50 contra o PMD-R con valores de SR de 1,05 e 0,96, respectivamente. Isto indica que o aceite de C. verum non ten un efecto sinérxico ou antagónico sobre a permetrina cando se proba en MCM-S e PMD-R. En contraste, os aceites de C. rotundus e A. galanga mostraron un efecto sinérxico significativo ao reducir significativamente os valores DL50 da permetrina en MCM-S ou PMD-R. Cando a permetrina se combinou con EO de C. rotundus e A. galanga, os valores SR da mestura EO-permetrina para MCM-S foron 6,28 e 4,00, respectivamente. Ademais, cando a permetrina se avaliou fronte a PMD-R en combinación con C. rotundus (SR = 8,81) ou A. galanga (SR = 1233,33), os valores SR aumentaron significativamente. Cómpre sinalar que tanto C. rotundus como A. galanga aumentaron significativamente a toxicidade da permetrina contra o PMD-R Ae. aegypti. Do mesmo xeito, descubriuse que o PBO aumentaba a toxicidade da permetrina con valores de SR de 1,69 e 5,69 para as cepas MCM-S e PMD-R, respectivamente. Dado que C. rotundus e A. galanga tiveron os valores de SR máis altos, consideráronse os mellores sinérxicos para mellorar a toxicidade da permetrina en MCM-S e PMD-R, respectivamente.
Varios estudos previos informaron do efecto sinérxico de combinacións de insecticidas sintéticos e extractos de plantas contra diversas especies de mosquitos. Un bioensaio larvicida contra Anopheles Stephensi estudado por Kalayanasundaram e Das [65] mostrou que o fentión, un organofosforado de amplo espectro, estaba asociado con Cleodendron inerme, Pedalium murax e Parthenium hysterophorus. Observouse unha sinerxía significativa entre os extractos cun efecto sinérxico (SF) de 1,31, 1,38, 1,40, 1,48, 1,61 e 2,23, respectivamente. Nunha selección larvicida de 15 especies de mangleiros, descubriuse que o extracto de éter de petróleo de raíces flotantes de mangleiros era o máis eficaz contra Culex quinquefasciatus cun valor LC50 de 25,7 mg/L [66]. Tamén se informou de que o efecto sinérxico deste extracto e o insecticida botánico piretro reducen a CL50 da piretro contra as larvas de C. quinquefasciatus de 0,132 mg/L a 0,107 mg/L; ademais, neste estudo utilizouse un cálculo de SF de 1,23. 34,35,44]. Avaliouse a eficacia combinada do extracto de raíz de citroneloma e varios insecticidas sintéticos (por exemplo, fentión, cipermetrina (un piretroide sintético) e timetfos (un larvicida organofosforado)) contra os mosquitos Anopheles. Stephensi [54] e C. quinquefasciatus [34]. O uso combinado de cipermetrina e extracto de éter de petróleo de froitos amarelos mostrou un efecto sinérxico sobre a cipermetrina en todas as proporcións. A proporción máis eficaz foi a combinación binaria 1:1 con valores de CL50 e SF de 0,0054 ppm e 6,83, respectivamente, en relación con An. Stephen West[54]. Mentres que unha mestura binaria 1:1 de S. xanthocarpum e temephos foi antagonista (SF = 0,6406), a combinación S. xanthocarpum-fention (1:1) mostrou actividade sinérxica contra C. quinquefasciatus cun SF de 1,3125 [34]]. Tong e Blomquist [35] estudaron os efectos do óxido de etileno vexetal sobre a toxicidade do carbarilo (un carbamato de amplo espectro) e a permetrina para os mosquitos Aedes. Aedes aegypti. Os resultados mostraron que o óxido de etileno do ágar, a pementa negra, o xenebreiro, o helichrysum, o sándalo e o sésamo aumentaba a toxicidade do carbarilo para os mosquitos Aedes. Os valores de SR das larvas de Aedes aegypti varían de 1,0 a 7,0. En contraste, ningún dos OE foi tóxico para os mosquitos Aedes adultos. Nesta fase, non se rexistraron efectos sinérxicos para a combinación de Aedes aegypti e EO-carbaril. O PBO utilizouse como control positivo para mellorar a toxicidade do carbaril contra os mosquitos Aedes. Os valores de SR das larvas e adultos de Aedes aegypti son 4,9-9,5 e 2,3, respectivamente. Só se analizaron mesturas binarias de permetrina e EO ou PBO para determinar a súa actividade larvicida. A mestura EO-permetrina tivo un efecto antagonista, mentres que a mestura PBO-permetrina tivo un efecto sinérxico contra os mosquitos Aedes. Larvas de Aedes aegypti. Non obstante, aínda non se realizaron experimentos de dose-resposta nin avaliación da SR para mesturas PBO-permetrina. Aínda que se obtiveron poucos resultados en canto aos efectos sinérxicos das combinacións fitosintéticas contra os vectores de mosquitos, estes datos apoian os resultados existentes, que abren a posibilidade de engadir sinérxicos non só para reducir a dose aplicada, senón tamén para aumentar o efecto letal. Eficiencia dos insectos. Ademais, os resultados deste estudo demostraron por primeira vez que os aceites de C. rotundus e A. galanga exercen de forma sinerxética unha eficacia significativamente maior contra cepas de mosquitos Aedes susceptibles e resistentes aos piretroides en comparación co PBO cando se combinan coa toxicidade da permetrina. Aedes aegypti. Non obstante, resultados inesperados da análise sinérxica mostraron que o aceite de C. verum tiña a maior actividade antiadultos contra ambas as cepas de Aedes. Sorprendentemente, o efecto tóxico da permetrina sobre Aedes aegypti foi insatisfactorio. As variacións nos efectos tóxicos e nos efectos sinérxicos poden deberse en parte á exposición a diferentes tipos e niveis de compoñentes bioactivos nestes aceites.
Malia os esforzos por comprender como mellorar a eficiencia, os mecanismos sinérxicos seguen sen estar claros. As posibles razóns para a diferente eficacia e potencial sinérxico poden incluír diferenzas na composición química dos produtos probados e diferenzas na susceptibilidade aos mosquitos asociadas co estado e desenvolvemento da resistencia. Existen diferenzas entre os compoñentes principais e secundarios do óxido de etileno probados neste estudo, e demostrouse que algúns destes compostos teñen efectos repelentes e tóxicos contra unha variedade de pragas e vectores de enfermidades [61,62,64,67,68]. Non obstante, os principais compostos caracterizados nos aceites de C. rotundus, A. galanga e C. verum, como o cipern, o β-bisaboleno e o cinamaldehido, non se probaron neste artigo polas súas actividades antiadultos e sinérxicas contra o Ae, respectivamente. Aedes aegypti. Polo tanto, necesítanse estudos futuros para illar os ingredientes activos presentes en cada aceite esencial e dilucidar a súa eficacia insecticida e as interaccións sinérxicas contra este vector de mosquitos. En xeral, a actividade insecticida depende da acción e reacción entre os velenos e os tecidos dos insectos, que se pode simplificar e dividir en tres etapas: penetración na pel do corpo do insecto e nas membranas dos órganos diana, activación (= interacción co obxectivo) e desintoxicación de substancias tóxicas [57, 69]. Polo tanto, o sinerxismo dos insecticidas que resulta nun aumento da eficacia das combinacións de tóxicos require polo menos unha destas categorías, como un aumento da penetración, unha maior activación dos compostos acumulados ou unha desintoxicación menos reducida do ingrediente activo do pesticida. Por exemplo, a tolerancia á enerxía atrasa a penetración da cutícula a través dunha cutícula engrosada e a resistencia bioquímica, como o metabolismo mellorado dos insecticidas observado nalgunhas cepas de insectos resistentes [70, 71]. A significativa eficacia dos AE para aumentar a toxicidade da permetrina, especialmente contra o PMD-R, pode indicar unha solución ao problema da resistencia aos insecticidas mediante a interacción cos mecanismos de resistencia [57, 69, 70, 71]. Tong e Blomquist [35] apoiaron os resultados deste estudo demostrando unha interacción sinérxica entre os AE e os pesticidas sintéticos. En *E. aegypti*, existen evidencias de actividade inhibitoria contra encimas desintoxicantes, incluíndo as monooxixenases e carboxilesterases do citocromo P450, que están estreitamente asociadas co desenvolvemento de resistencia aos pesticidas tradicionais. Non só se di que o PBO é un inhibidor metabólico da monooxixenase do citocromo P450, senón que tamén mellora a penetración dos insecticidas, como demostra o seu uso como control positivo en estudos sinérxicos [35, 72]. Curiosamente, o 1,8-cineol, un dos compoñentes importantes que se atopan no aceite de galangal, é coñecido polos seus efectos tóxicos sobre as especies de insectos [22, 63, 73] e informouse de que ten efectos sinérxicos en varias áreas de investigación da actividade biolóxica [74]. . ,75,76,77]. Ademais, o 1,8-cineol en combinación con varios fármacos, incluíndo a curcumina [78], o 5-fluorouracilo [79], o ácido mefenámico [80] e a zidovudina [81] tamén ten un efecto promotor da permeación. in vitro. Polo tanto, o posible papel do 1,8-cineol na acción insecticida sinérxica non é só como ingrediente activo, senón tamén como potenciador da penetración. Debido ao maior sinerxismo coa permetrina, especialmente contra o PMD-R, os efectos sinérxicos do aceite de galangal e o aceite de trichosanthes observados neste estudo poden ser o resultado de interaccións con mecanismos de resistencia, é dicir, unha maior permeabilidade ao cloro. Os piretroides aumentan a activación dos compostos acumulados e inhiben encimas desintoxicantes como as monooxixenases e as carboxilesterases do citocromo P450. Non obstante, estes aspectos requiren máis estudos para dilucidar o papel específico do EO e os seus compostos illados (só ou en combinación) nos mecanismos sinérxicos.
En 1977, informouse de niveis crecentes de resistencia á permetrina nas principais poboacións de vectores de Tailandia e, durante as décadas seguintes, o uso da permetrina foi substituído en gran medida por outros produtos químicos piretroides, especialmente os substituídos pola deltametrina [82]. Non obstante, a resistencia dos vectores á deltametrina e outras clases de insecticidas é extremadamente común en todo o país debido ao uso excesivo e persistente [14, 17, 83, 84, 85, 86]. Para combater este problema, recoméndase rotar ou reutilizar os pesticidas descartados que antes eran eficaces e menos tóxicos para os mamíferos, como a permetrina. Actualmente, aínda que o uso da permetrina se reduciu nos recentes programas de control de mosquitos do goberno nacional, aínda se pode atopar resistencia á permetrina nas poboacións de mosquitos. Isto pode deberse á exposición dos mosquitos a produtos comerciais de control de pragas domésticos, que consisten principalmente en permetrina e outros piretroides [14, 17]. Polo tanto, a reutilización exitosa da permetrina require o desenvolvemento e a implementación de estratexias para reducir a resistencia dos vectores. Aínda que ningún dos aceites esenciais probados individualmente neste estudo foi tan eficaz como a permetrina, o traballo conxunto coa permetrina deu lugar a efectos sinérxicos impresionantes. Isto é unha indicación prometedora de que a interacción do aceite esencial cos mecanismos de resistencia fai que a combinación de permetrina con aceite esencial sexa máis eficaz que o insecticida ou o aceite esencial só, especialmente contra o PMD-R Ae. Aedes aegypti. Os beneficios das mesturas sinérxicas para aumentar a eficacia, a pesar do uso de doses máis baixas para o control de vectores, poden levar a unha mellor xestión da resistencia e a unha redución dos custos [33, 87]. A partir destes resultados, é gratificante observar que os aceites esenciales de A. galanga e C. rotundus foron significativamente máis eficaces que o PBO na sinerxización da toxicidade da permetrina tanto nas cepas MCM-S como nas PMD-R e son unha alternativa potencial aos axudas ergoxénicas tradicionais.
Os OE seleccionados tiveron efectos sinérxicos significativos no aumento da toxicidade en adultos contra o PMD-R Ae. aegypti, especialmente o aceite de galangal, ten un valor SR de ata 1233,33, o que indica que o OE ten un amplo potencial como sinérxico para mellorar a eficacia da permetrina. Isto pode estimular o uso dun novo produto natural activo, que en conxunto poderían aumentar o uso de produtos altamente eficaces para o control de mosquitos. Tamén revela o potencial do óxido de etileno como un sinérxico alternativo para mellorar eficazmente os insecticidas antigos ou tradicionais para abordar os problemas de resistencia existentes nas poboacións de mosquitos. O uso de plantas facilmente dispoñibles nos programas de control de mosquitos non só reduce a dependencia de materiais importados e caros, senón que tamén estimula os esforzos locais para fortalecer os sistemas de saúde pública.
Estes resultados amosan claramente o significativo efecto sinérxico producido pola combinación de óxido de etileno e permetrina. Os resultados destacan o potencial do óxido de etileno como sinérxico vexetal no control de mosquitos, aumentando a eficacia da permetrina contra os mosquitos, especialmente en poboacións resistentes. Os desenvolvementos e a investigación futuros requirirán bioanálise sinérxica de aceites de galangal e alpinia e os seus compostos illados, combinacións de insecticidas de orixe natural ou sintética contra múltiples especies e estadios de mosquitos, e probas de toxicidade contra organismos non obxectivo. Uso práctico do óxido de etileno como un sinérxico alternativo viable.
Organización Mundial da Saúde. Estratexia mundial para a prevención e o control da dengue 2012-2020. Xenebra: Organización Mundial da Saúde, 2012.
Weaver SC, Costa F., Garcia-Blanco MA, Ko AI, Ribeiro GS, Saade G., et al. Virus Zika: historia, aparición, bioloxía e perspectivas de control. Investigación antiviral. 2016;130:69–80.
Organización Mundial da Saúde. Ficha informativa sobre o dengue. 2016. http://www.searo.who.int/entity/vector_borne_tropical_diseases/data/data_factsheet/en/. Data de acceso: 20 de xaneiro de 2017
Departamento de Saúde Pública. Estado actual dos casos de febre da dengue e febre hemorráxica da dengue en Tailandia. 2016. http://www.m-society.go.th/article_attach/13996/17856.pdf. Data de acceso: 6 de xaneiro de 2017
Ooi EE, Goh CT, Gabler DJ. 35 anos de prevención da dengue e control de vectores en Singapur. Enfermidade infecciosa repentina. 2006;12:887–93.
Morrison AC, Zielinski-Gutierrez E, Scott TW, Rosenberg R. Identificar os desafíos e propoñer solucións para controlar os vectores virais Aedes aegypti. PLOS Medicine. 2008;5:362–6.
Centros para o Control e a Prevención de Enfermidades. Febre da dengue, entomoloxía e ecoloxía. 2016. http://www.cdc.gov/dengue/entomologyecology/. Data de acceso: 6 de xaneiro de 2017
Ohimain EI, Angaye TKN, Bassey SE. Comparación da actividade larvicida de follas, cortiza, talos e raíces de Jatropa curcas (Euphorbiaceae) contra o vector da malaria Anopheles gambiae. SZhBR. 2014;3:29-32.
Soleimani-Ahmadi M, Watandoust H, Zareh M. Características do hábitat das larvas de *Anopheles* nas zonas con malaria do programa de erradicación da malaria no sueste de Irán. Asia Pacific J Trop Biomed. 2014;4(Supl. 1):S73–80.
Bellini R, Zeller H, Van Bortel W. Revisión das estratexias para o control de vectores, a prevención e o control dos brotes do virus do Nilo Occidental e os desafíos aos que se enfronta Europa. Parasites vector. 2014;7:323.
Muthusamy R., Shivakumar MS Selección e mecanismos moleculares da resistencia á cipermetrina en eirugas vermellas (Amsacta albistriga Walker). Fisioloxía bioquímica das pragas. 2014;117:54–61.
Ramkumar G., Shivakumar MS Estudo de laboratorio da resistencia á permetrina e da resistencia cruzada de Culex quinquefasciatus a outros insecticidas. Centro de Investigación Palastor. 2015;114:2553–60.
Matsunaka S, Hutson DH, Murphy SD. Química dos pesticidas: benestar humano e medio ambiente, vol. 3: Mecanismo de acción, metabolismo e toxicoloxía. Nova York: Pergamon Press, 1983.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Souvonkert V, Kongmi M, Korbel AV, Ngoen-Klan R. Unha revisión da resistencia aos insecticidas e a evitación conductual dos vectores de enfermidades humanas en Tailandia. Parasites vector. 2013;6:280.
Chareonviriyaphap T, Aum-Aung B, Ratanatham S. Patróns actuais de resistencia aos insecticidas entre os vectores de mosquitos en Tailandia. Southeast Asia J Trop Med Public Health. 1999;30:184-94.
Chareonviriyaphap T, Bangs MJ, Ratanatham S. Estado da malaria en Tailandia. Southeast Asia J Trop Med Public Health. 2000;31:225–37.
Plernsub S, Saingamsuk J, Yanola J, Lumjuan N, Thippavankosol P, Walton S, Somboon P. Frecuencia temporal das mutacións de resistencia á inactivación F1534C e V1016G en mosquitos Aedes aegypti en Chiang Mai, Tailandia, e o impacto das mutacións na eficiencia dos pulverizadores de néboa térmica que conteñen piretroides. Aktatrop. 2016;162:125–32.
Vontas J, Kioulos E, Pavlidi N, Moru E, Della Torre A, Ranson H. Insecticide resistance in the main dengue vectors Aedes albopictus and Aedes aegypti. Fisioloxía bioquímica das pragas. 2012;104:126–31.
Data de publicación: 08-07-2024