A leishmaniose visceral (LV), coñecida como kala-azar no subcontinente indio, é unha enfermidade parasitaria causada polo protozoo flaxelado Leishmania que pode ser mortal se non se trata axiña. O flebótomo Phlebotomus argentipes é o único vector confirmado da LV no sueste asiático, onde se controla mediante fumigación residual en interiores (IRS), un insecticida sintético. O uso de DDT nos programas de control da LV provocou o desenvolvemento de resistencia nos flebótomos, polo que o DDT foi substituído polo insecticida alfa-cipermetrina. Non obstante, a alfa-cipermetrina actúa de xeito similar ao DDT, polo que o risco de resistencia nos flebótomos aumenta baixo o estrés causado pola exposición repetida a este insecticida. Neste estudo, avaliamos a susceptibilidade dos mosquitos salvaxes e a súa proxenie F1 mediante o bioensaio de botella dos CDC.
Recollemos mosquitos en 10 aldeas do distrito de Muzaffarpur, en Bihar, na India. Oito aldeas continuaron a usar mosquitos de alta potenciacipermetrinaPara a fumigación en interiores, unha aldea deixou de usar cipermetrina de alta potencia para a fumigación en interiores e unha aldea nunca usou cipermetrina de alta potencia para a fumigación en interiores. Os mosquitos recollidos expuxéronse a unha dose diagnóstica predefinida durante un tempo definido (3 μg/ml durante 40 min) e a taxa de inhibición e a mortalidade rexistráronse 24 h despois da exposición.
As taxas de mortalidade dos mosquitos salvaxes oscilaron entre o 91,19 % e o 99,47 %, e as das súas xeracións F1 oscilaron entre o 91,70 % e o 98,89 %. Vinte e catro horas despois da exposición, a mortalidade dos mosquitos salvaxes oscilou entre o 89,34 % e o 98,93 %, e a da súa xeración F1 oscilou entre o 90,16 % e o 98,33 %.
Os resultados deste estudo indican que pode desenvolver resistencia en P. argentipes, o que indica a necesidade de monitorización e vixilancia continuas para manter o control unha vez que se logre a erradicación.
A leishmaniose visceral (LV), coñecida como kala-azar no subcontinente indio, é unha enfermidade parasitaria causada polo protozoo flaxelado Leishmania e que se transmite a través da picadura de moscas da area femias infectadas (Diptera: Myrmecophaga). As moscas da area son o único vector confirmado da LV no sueste asiático. A India está preto de acadar o obxectivo de eliminar a LV. Non obstante, para manter baixas taxas de incidencia despois da erradicación, é fundamental reducir a poboación de vectores para evitar unha posible transmisión.
O control dos mosquitos no sueste asiático realízase mediante a pulverización residual de interiores (IRS) con insecticidas sintéticos. O comportamento de repouso reservado das patas prateadas convérteas nun obxectivo axeitado para o control de insecticidas mediante a pulverización residual de interiores [1]. A pulverización residual de interiores con diclorodifeniltricloroetano (DDT) no marco do Programa Nacional de Control da Malaria na India tivo efectos indirectos significativos no control das poboacións de mosquitos e na redución significativa dos casos de leishmaniose visceral [2]. Este control non planificado da leishmaniose visceral levou ao Programa Indio de Erradicación da Leishmaniose Visceral a adoptar a pulverización residual de interiores como método principal de control das patas prateadas. En 2005, os gobernos da India, Bangladesh e Nepal asinaron un memorando de entendemento co obxectivo de eliminar a leishmaniose visceral para 2015 [3]. Os esforzos de erradicación, que implican unha combinación de control de vectores e diagnóstico e tratamento rápidos de casos humanos, tiñan como obxectivo entrar na fase de consolidación para 2015, un obxectivo revisado posteriormente para 2017 e despois para 2020.[4] A nova folla de ruta global para eliminar as enfermidades tropicais desatendidas inclúe a eliminación da leishmaniose visceral para 2030.[5]
A medida que a India entra na fase de poserradicación da enfermidade da beta-cipermetrina (BCVD), é imprescindible garantir que non se desenvolva unha resistencia significativa á beta-cipermetrina. A razón da resistencia é que tanto o DDT como a cipermetrina teñen o mesmo mecanismo de acción, é dicir, que se dirixen á proteína VGSC [21]. Polo tanto, o risco de desenvolvemento de resistencia nos flebótomos pode verse incrementado polo estrés causado pola exposición regular a unha cipermetrina altamente potente. Polo tanto, é imprescindible monitorizar e identificar posibles poboacións de flebótomos resistentes a este insecticida. Neste contexto, o obxectivo deste estudo foi monitorizar o estado de susceptibilidade dos flebótomos salvaxes utilizando doses diagnósticas e duracións de exposición determinadas por Chaubey et al. [20] estudaron P. argentipes de diferentes aldeas do distrito de Muzaffarpur de Bihar, India, que utilizaron continuamente sistemas de pulverización en interiores tratados con cipermetrina (aldeas IPS continuas). Comparouse o estado de susceptibilidade da *P. argentipes* silvestre das aldeas que deixaran de usar sistemas de pulverización de interiores tratados con cipermetrina (antigas aldeas IPS) e as que nunca usaran sistemas de pulverización de interiores tratados con cipermetrina (aldeas non IPS) mediante o bioensaio en botella dos CDC.
Seleccionáronse dez aldeas para o estudo (Fig. 1; Táboa 1), das cales oito tiñan un historial de pulverización continua en interiores con piretroides sintéticos (hipermetrina; designadas como aldeas con hipermetrina continua) e tiveron casos de leishmaniose visceral (polo menos un caso) nos últimos 3 anos. Das dúas aldeas restantes do estudo, unha aldea que non implementou a pulverización en interiores con beta-cipermetrina (aldea sen pulverización en interiores) foi seleccionada como aldea de control e a outra aldea que tiña pulverización intermitente en interiores con beta-cipermetrina (aldea con pulverización intermitente en interiores/antiga aldea con pulverización en interiores) foi seleccionada como aldea de control. A selección destas aldeas baseouse na coordinación co Departamento de Saúde e o Equipo de Pulverización en Interiores e na validación do MicroPlan de Acción de Pulverización en Interiores no Distrito de Muzaffarpur.
Mapa xeográfico do distrito de Muzaffarpur que mostra a localización das aldeas incluídas no estudo (1–10). Localizacións do estudo: 1, Manifulkaha; 2, Ramdas Majhauli; 3, Madhubani; 4, Anandpur Haruni; 5, Pandey; 6, Hirapur; 7, Madhopur Hazari; 8, Hamidpur; 9, Noonfara; 10, Simara. O mapa elaborouse empregando o software QGIS (versión 3.30.3) e Open Assessment Shapefile.
As botellas para os experimentos de exposición preparáronse segundo os métodos de Chaubey et al. [20] e Denlinger et al. [22]. En resumo, preparáronse botellas de vidro de 500 mL un día antes do experimento e a parede interior das botellas recubriuse co insecticida indicado (a dose diagnóstica de α-cipermetrina foi de 3 μg/mL) aplicando unha solución de acetona do insecticida (2,0 mL) ao fondo, ás paredes e á tapa das botellas. Despois, cada botella secouse nun rodillo mecánico durante 30 minutos. Durante este tempo, desenrosque lentamente a tapa para permitir que a acetona se evapore. Despois de 30 minutos de secado, retire a tapa e xire a botella ata que toda a acetona se evapore. Despois, as botellas deixáronse abertas para secar durante a noite. Para cada proba repetida, unha botella, utilizada como control, recubriuse con 2,0 mL de acetona. Todas as botellas reutilizáronse ao longo dos experimentos despois dunha limpeza axeitada segundo o procedemento descrito por Denlinger et al. e a Organización Mundial da Saúde [22, 23].
O día seguinte á preparación do insecticida, retiráronse de 30 a 40 mosquitos salvaxes (femias famentas) das gaiolas nos frascos e sopraron suavemente en cada frasco. Utilizouse aproximadamente o mesmo número de moscas para cada frasco recuberto con insecticida, incluído o de control. Repita isto polo menos de cinco a seis veces en cada aldea. Despois de 40 minutos de exposición ao insecticida, rexistrouse o número de moscas derribadas. Capturáronse todas as moscas cun aspirador mecánico, colocáronse en recipientes de cartón dun litro cubertos con malla fina e colocáronse nunha incubadora separada nas mesmas condicións de humidade e temperatura coa mesma fonte de alimento (bólas de algodón empapadas en solución de azucre ao 30 %) que as colonias sen tratar. A mortalidade rexistrouse 24 horas despois da exposición ao insecticida. Diseccionáronse e examináronse todos os mosquitos para confirmar a identidade das especies. O mesmo procedemento realizouse coas moscas descendentes F1. As taxas de derribamento e mortalidade rexistráronse 24 horas despois da exposición. Se a mortalidade nos frascos de control era < 5 %, non se realizou ningunha corrección da mortalidade nas réplicas. Se a mortalidade no frasco de control era ≥ 5 % e ≤ 20 %, a mortalidade nos frascos de proba desa réplica corrixíase mediante a fórmula de Abbott. Se a mortalidade no grupo de control superaba o 20 %, descartábase todo o grupo de proba [24, 25, 26].
Mortalidade media dos mosquitos P. argentipes capturados no medio natural. As barras de erro representan os erros estándar da media. A intersección das dúas liñas horizontais vermellas co gráfico (mortalidade do 90 % e do 98 %, respectivamente) indica a xanela de mortalidade na que se pode desenvolver resistencia.[25]
Mortalidade media da proxenie F1 de P. argentipes capturada no medio silvestre. As barras de erro representan os erros estándar da media. As curvas intersectadas polas dúas liñas horizontais vermellas (mortalidade do 90 % e do 98 %, respectivamente) representan o rango de mortalidade no que se pode desenvolver resistencia [25].
Descubriuse que os mosquitos da aldea de control/non IRS (Manifulkaha) eran moi sensibles aos insecticidas. A mortalidade media (±EE) dos mosquitos capturados na natureza 24 horas despois da inactivación e a exposición foi do 99,47 ± 0,52 % e do 98,93 ± 0,65 %, respectivamente, e a mortalidade media da descendencia F1 foi do 98,89 ± 1,11 % e do 98,33 ± 1,11 %, respectivamente (táboas 2 e 3).
Os resultados deste estudo indican que os flebótomos de patas prateadas poden desenvolver resistencia ao piretroide sintético (SP) α-cipermetrina en aldeas onde o piretroide (SP) α-cipermetrina se usaba habitualmente. Pola contra, os flebótomos de patas prateadas recollidos en aldeas non cubertas polo programa de control/IRS resultaron ser moi susceptibles. O seguimento da susceptibilidade das poboacións de flebótomos salvaxes é importante para controlar a eficacia dos insecticidas utilizados, xa que esta información pode axudar a xestionar a resistencia aos insecticidas. Informáronse regularmente de altos niveis de resistencia ao DDT en flebótomos de zonas endémicas de Bihar debido á presión de selección histórica do IRS que usa este insecticida [1].
Descubrimos que o *P. argentipes* é moi sensible aos piretroides, e os ensaios de campo na India, Bangladesh e Nepal demostraron que o *IRS* tiña unha alta eficacia entomolóxica cando se usaba en combinación con cipermetrina ou deltametrina [19, 26, 27, 28, 29]. Recentemente, Roy et al. [18] informaron de que o *P. argentipes* desenvolvera resistencia aos piretroides no Nepal. O noso estudo de susceptibilidade de campo mostrou que os mosquitos de patas prateadas recollidos en aldeas non expostas ao *IRS* eran moi susceptibles, pero as mosquitos recollidos en aldeas con *IRS* intermitente/antiga e IRS continua (a mortalidade oscilou entre o 90 % e o 97 %, agás os mosquitos de Anandpur-Haruni, que tiveron unha mortalidade do 89,34 % ás 24 horas posteriores á exposición) probablemente eran resistentes á cipermetrina altamente eficaz [25]. Unha posible razón para o desenvolvemento desta resistencia é a presión exercida pola fumigación rutineira en interiores (IRS) e os programas locais de fumigación baseados en casos, que son procedementos estándar para xestionar os brotes de kala-azar en zonas/bloques/aldeas endémicas (Procedemento operativo estándar para a investigación e xestión de brotes [30]). Os resultados deste estudo proporcionan indicios temperáns do desenvolvemento de presión selectiva contra a cipermetrina, altamente eficaz. Desafortunadamente, os datos históricos de susceptibilidade para esta rexión, obtidos mediante o bioensaio en botella dos CDC, non están dispoñibles para a súa comparación; todos os estudos previos monitorizaron a susceptibilidade a P. argentipes utilizando papel impregnado con insecticidas da OMS. As doses diagnósticas de insecticidas nas tiras reactivas da OMS son as concentracións de identificación recomendadas de insecticidas para o seu uso contra os vectores da malaria (Anopheles gambiae), e a aplicabilidade operativa destas concentracións aos flebótomos non está clara porque os flebótomos voan con menos frecuencia que os mosquitos e pasan máis tempo en contacto co substrato no bioensaio [23].
Os piretroides sintéticos úsanse nas zonas endémicas de VL do Nepal desde 1992, alternando cos compostos específicos alfa-cipermetrina e lambda-cialotrina para o control dos flebótomos [31], e a deltametrina tamén se emprega en Bangladesh desde 2012 [32]. Detectouse resistencia fenotípica en poboacións salvaxes de flebótomos de patas prateadas en zonas onde os piretroides sintéticos se empregaron durante moito tempo [18, 33, 34]. Detectouse unha mutación non sinónima (L1014F) en poboacións salvaxes do flebótomo da India e asociouse coa resistencia ao DDT, o que suxire que a resistencia aos piretroides xorde a nivel molecular, xa que tanto o DDT como o piretroide (alfa-cipermetrina) teñen como obxectivo o mesmo xene no sistema nervioso dos insectos [17, 34]. Polo tanto, a avaliación sistemática da susceptibilidade á cipermetrina e a monitorización da resistencia aos mosquitos son esenciais durante os períodos de erradicación e pos-erradicación.
Unha posible limitación deste estudo é que empregamos o bioensaio en vial dos CDC para medir a susceptibilidade, pero todas as comparacións empregaron resultados de estudos previos que empregaron o kit de bioensaio da OMS. Os resultados dos dous bioensaios poden non ser directamente comparables porque o bioensaio en vial dos CDC mide a inhibición ao final do período de diagnóstico, mentres que o bioensaio do kit da OMS mide a mortalidade ás 24 ou 72 horas posteriores á exposición (esta última para compostos de acción lenta) [35]. Outra posible limitación é o número de aldeas con IRS neste estudo en comparación cunha aldea sen IRS e unha aldea sen IRS/antiga IRS. Non podemos asumir que o nivel de susceptibilidade dos mosquitos vectores observado en aldeas individuais dun distrito sexa representativo do nivel de susceptibilidade noutras aldeas e distritos de Bihar. A medida que a India entra na fase de poseliminación do virus da leucemia, é imperativo previr o desenvolvemento significativo de resistencia. É necesario un seguimento rápido da resistencia nas poboacións de flebótomos de diferentes distritos, bloques e áreas xeográficas. Os datos presentados neste estudo son preliminares e deberían verificarse mediante comparación coas concentracións de identificación publicadas pola Organización Mundial da Saúde [35] para obter unha idea máis específica do estado de susceptibilidade de P. argentipes nestas zonas antes de modificar os programas de control de vectores para manter baixas as poboacións de flebótomos e apoiar a eliminación do virus da leucemia.
O mosquito P. argentipes, o vector do virus da leucose, pode comezar a mostrar signos temperáns de resistencia á cipermetrina, unha substancia altamente eficaz. É necesario un seguimento regular da resistencia aos insecticidas nas poboacións salvaxes de P. argentipes para manter o impacto epidemiolóxico das intervencións de control de vectores. É necesario e recoméndase a rotación de insecticidas con diferentes modos de acción e/ou a avaliación e o rexistro de novos insecticidas para xestionar a resistencia aos insecticidas e apoiar a eliminación do virus da leucose na India.
Data de publicación: 17 de febreiro de 2025