A leishmaniose visceral (LV), coñecida como kala-azar no subcontinente indio, é unha enfermidade parasitaria causada polo protozoo flaxelado Leishmania que pode ser mortal se non se trata rapidamente. O flebotomo Phlebotomus argentipes é o único vector confirmado de LV no sueste asiático, onde se controla mediante pulverización residual en interiores (IRS), un insecticida sintético. O uso do DDT nos programas de control da LV deu lugar ao desenvolvemento de resistencia en flebótomos, polo que o DDT foi substituído polo insecticida alfa-cipermetrina. Non obstante, a alfa-cipermetrina actúa de forma similar ao DDT, polo que o risco de resistencia dos flebótomos aumenta ante o estrés provocado pola exposición repetida a este insecticida. Neste estudo, avaliamos a susceptibilidade dos mosquitos salvaxes e a súa proxenie F1 mediante o bioensaio de botella CDC.
Recollemos mosquitos de 10 aldeas do distrito de Muzaffarpur, en Bihar, na India. Oito aldeas seguiron usando alta potenciacipermetrinapara pulverización interior, unha aldea deixou de usar cipermetrina de alta potencia para pulverización interior e unha aldea nunca utilizou cipermetrina de alta potencia para pulverización interior. Os mosquitos recollidos foron expostos a unha dose diagnóstica predefinida durante un tempo definido (3 μg/ml durante 40 min), e a taxa de caída e a mortalidade rexistráronse 24 h despois da exposición.
As taxas de morte dos mosquitos salvaxes oscilaron entre o 91,19% e o 99,47%, e as das súas xeracións F1 oscilaron entre o 91,70% e o 98,89%. Vinte e catro horas despois da exposición, a mortalidade dos mosquitos silvestres oscilou entre o 89,34% e o 98,93%, e a da súa xeración F1 oscilou entre o 90,16% e o 98,33%.
Os resultados deste estudo indican que pode desenvolverse resistencia en P. argentipes, o que indica a necesidade dun seguimento e vixilancia continuados para manter o control unha vez conseguida a erradicación.
A leishmaniose visceral (LV), coñecida como kala-azar no subcontinente indio, é unha enfermidade parasitaria causada polo protozoo flaxelado Leishmania e transmitida a través da picadura de moscas da area infectadas (Diptera: Myrmecophaga). Os moscas da area son o único vector confirmado de VL no sueste asiático. A India está preto de lograr o obxectivo de eliminar a VL. Non obstante, para manter baixas taxas de incidencia despois da erradicación, é fundamental reducir a poboación de vectores para previr a posible transmisión.
O control dos mosquitos no sueste asiático realízase mediante pulverización residual en interiores (IRS) utilizando insecticidas sintéticos. O comportamento en repouso secreto das patas plateadas convérteo nun branco axeitado para o control de insecticidas mediante a pulverización residual en interiores [1]. A pulverización residual de diclorodifeniltricloroetano (DDT) en interiores no marco do Programa Nacional de Control da Malaria na India tivo efectos significativos no control das poboacións de mosquitos e na redución significativa dos casos de LV [2]. Este control non planificado da VL levou ao Programa de Erradicación de VL da India a adoptar a pulverización residual en interiores como método principal de control de Silverlegs. En 2005, os gobernos da India, Bangladesh e Nepal asinaron un memorando de entendemento co obxectivo de eliminar a VL para 2015 [3]. Os esforzos de erradicación, que implicaban unha combinación de control de vectores e diagnóstico e tratamento rápidos de casos humanos, tiñan como obxectivo entrar na fase de consolidación para 2015, un obxectivo que se revisou posteriormente para 2017 e despois para 2020.[4] A nova folla de ruta global para eliminar as enfermidades tropicais desatendidas inclúe a eliminación da LV ata 2030.[5]
A medida que a India entra na fase posterior á erradicación do BCVD, é imperativo garantir que non se desenvolva unha resistencia significativa á beta-cipermetrina. O motivo da resistencia é que tanto o DDT como a cipermetrina teñen o mesmo mecanismo de acción, é dicir, teñen como obxectivo a proteína VGSC[21]. Así, o risco de desenvolvemento de resistencia en flebótomos pode aumentar polo estrés causado pola exposición regular á cipermetrina altamente potente. Polo tanto, é imperativo vixiar e identificar posibles poboacións de flebótomos resistentes a este insecticida. Neste contexto, o obxectivo deste estudo foi monitorizar o estado de susceptibilidade dos flebótomos silvestres utilizando doses de diagnóstico e duracións de exposición determinadas por Chaubey et al. [20] estudou P. argentipes de diferentes aldeas do distrito de Muzaffarpur en Bihar, na India, que utilizaba continuamente sistemas de pulverización interior tratados con cipermetrina (aldeas continuas de IPS). Comparouse o estado de susceptibilidade de P. argentipes silvestres de aldeas que deixaran de usar sistemas de pulverización interior tratados con cipermetrina (antigas aldeas IPS) e aqueles que nunca usaran sistemas de pulverización interior tratados con cipermetrina (aldeas non IPS) mediante o bioensaio de botellas CDC.
Seleccionáronse dez aldeas para o estudo (Fig. 1; Táboa 1), das cales oito tiñan antecedentes de pulverización interior continua de piretroides sintéticos (hipermetrina; designadas como aldeas de hipermetrina continua) e tiñan casos de LV (polo menos un caso) nos últimos 3 anos. Das dúas aldeas restantes do estudo, seleccionouse unha aldea que non implementou a pulverización interior de beta-cipermetrina (aldea de pulverización non interior) como a aldea de control e a outra aldea que tiña pulverización interior intermitente de beta-cipermetrina (aldea de pulverización interior intermitente/antiga aldea de pulverización interior) foi seleccionada como a aldea de control. A selección destas aldeas baseouse na coordinación co Departamento de Saúde e co Equipo de Pulverización Interior e na validación do Plan de Acción Micro de Pulverización Interior no Distrito de Muzaffarpur.
Mapa xeográfico do distrito de Muzaffarpur que mostra as localizacións das aldeas incluídas no estudo (1-10). Lugares de estudo: 1, Manifulkaha; 2, Ramdas Majhauli; 3, Madhubani; 4, Anandpur Haruni; 5, Pandey; 6, Hirapur; 7, Madhopur Hazari; 8, Hamidpur; 9, Noonfara; 10, Simara. O mapa preparouse mediante o software QGIS (versión 3.30.3) e o Open Assessment Shapefile.
As botellas para os experimentos de exposición preparáronse segundo os métodos de Chaubey et al. [20] e Denlinger et al. [22]. Brevemente, un día antes do experimento preparáronse botellas de vidro de 500 ml e cubriuse a parede interior das botellas co insecticida indicado (a dose diagnóstica de α-cipermetrina foi de 3 μg/ml) aplicando unha solución de acetona do insecticida (2,0 ml) ao fondo, ás paredes e á tapa das botellas. Despois, cada botella secou nun rolo mecánico durante 30 min. Durante este tempo, desenrosque lentamente a tapa para permitir que a acetona se evapore. Despois de 30 min de secado, retire o tapón e xire a botella ata que se evapore toda a acetona. Despois, as botellas deixáronse abertas para secar durante a noite. Para cada proba repetida, unha botella, usada como control, recubriuse con 2,0 ml de acetona. Todas as botellas foron reutilizadas ao longo dos experimentos despois da limpeza adecuada segundo o procedemento descrito por Denlinger et al. e a Organización Mundial da Saúde [22, 23].
O día seguinte á preparación do insecticida, 30-40 mosquitos capturados na natureza (femias famentosas) foron retirados das gaiolas en frascos e insuflados suavemente en cada vial. Utilizouse aproximadamente o mesmo número de moscas para cada botella recuberta de insecticida, incluído o control. Repita isto polo menos de cinco a seis veces en cada aldea. Despois de 40 minutos de exposición ao insecticida, rexistrouse o número de moscas derrubadas. Todas as moscas foron capturadas cun aspirador mecánico, colocadas en recipientes de cartón pintados cubertos con malla fina e colocadas nunha incubadora separada nas mesmas condicións de humidade e temperatura coa mesma fonte de alimento (bolas de algodón empapadas en solución de azucre ao 30%) que as colonias sen tratar. A mortalidade rexistrouse 24 horas despois da exposición ao insecticida. Todos os mosquitos foron disecados e examinados para confirmar a identidade da especie. O mesmo procedemento realizouse coas moscas da descendencia da F1. As taxas de caída e mortalidade rexistráronse 24 horas despois da exposición. Se a mortalidade nas botellas control era < 5%, non se fixo ningunha corrección de mortalidade nas réplicas. Se a mortalidade na botella de control era ≥ 5 % e ≤ 20 %, a mortalidade nos frascos de proba desa réplica foi corrixida mediante a fórmula de Abbott. Se a mortalidade no grupo control superou o 20%, o grupo de proba completo foi descartado [24, 25, 26].
Mortalidade media dos mosquitos P. argentipes capturados en estado salvaxe. As barras de erro representan os erros estándar da media. A intersección das dúas liñas horizontais vermellas co gráfico (90% e 98% de mortalidade, respectivamente) indica a xanela de mortalidade na que pode desenvolverse a resistencia.[25]
Mortalidade media da proxenie F1 de P. argentipes capturado en estado salvaxe. As barras de erro representan os erros estándar da media. As curvas cortadas polas dúas liñas horizontais vermellas (90% e 98% de mortalidade, respectivamente) representan o rango de mortalidade sobre o que pode desenvolverse a resistencia[25].
Os mosquitos da aldea de control/non IRS (Manifulkaha) descubriuse que eran moi sensibles aos insecticidas. A mortalidade media (± SE) dos mosquitos capturados en estado salvaxe 24 h despois da derriba e exposición foi de 99,47 ± 0,52% e 98,93 ± 0,65%, respectivamente, e a mortalidade media da descendencia F1 foi de 98,89 ± 1,11% e ± 98,89 ± 1,11% e 98,93 ± 0,65%, respectivamente. 3).
Os resultados deste estudo indican que as moscas da area de patas prateadas poden desenvolver resistencia á α-cipermetrina piretroide sintética (SP) nas aldeas onde se usaba habitualmente a α-cipermetrina piretroide (SP). Pola contra, as moscas da area de patas prateadas recollidas de aldeas non cubertas polo programa IRS/control foron moi susceptibles. O seguimento da susceptibilidade das poboacións de moscas da area silvestre é importante para controlar a eficacia dos insecticidas utilizados, xa que esta información pode axudar a xestionar a resistencia aos insecticidas. Os altos niveis de resistencia ao DDT foron reportados regularmente en moscas da area de áreas endémicas de Bihar debido á presión de selección histórica do IRS usando este insecticida [1].
Descubrimos que P. argentipes era moi sensible aos piretroides, e os ensaios de campo en India, Bangladesh e Nepal demostraron que o IRS tiña unha alta eficacia entomolóxica cando se usaba en combinación con cipermetrina ou deltametrina [19, 26, 27, 28, 29]. Recentemente, Roy et al. [18] informou de que P. argentipes desenvolvera resistencia aos piretroides en Nepal. O noso estudo de susceptibilidade de campo mostrou que as moscas da area de patas prateadas recollidas de aldeas non expostas ao IRS eran altamente susceptibles, pero as moscas recollidas de aldeas intermitentes/antigas IRS e continuas (a mortalidade variou entre o 90% e o 97%, excepto para os moscas da area de Anandpur-Haruni, que tiñan un 89,34% de mortalidade posexposición ás 24 horas) probablemente foron altamente resistentes ás 24 h. Unha das posibles razóns para o desenvolvemento desta resistencia é a presión exercida pola pulverización de rutina en interiores (IRS) e os programas de pulverización local baseados en casos, que son procedementos estándar para xestionar brotes de kala-azar en áreas/bloques/aldeas endémicas (Procedemento Operativo Estándar para a Investigación e Xestión de Brotes [30]. Os resultados deste estudo proporcionan indicacións precoces de presión selectiva contra o desenvolvemento altamente efectivo. Desafortunadamente, os datos históricos de susceptibilidade para esta rexión, obtidos mediante o bioensaio de botellas de CDC, non están dispoñibles para a súa comparación. non está claro porque os flebótomos voan con menos frecuencia que os mosquitos e pasan máis tempo en contacto co substrato no bioensaio [23].
Os piretroides sintéticos utilízanse en áreas endémicas de VL de Nepal desde 1992, alternando cos SP alfa-cipermetrina e lambda-cihalotrina para o control do fleboto [31], e a deltametrina tamén se usa en Bangladesh desde 2012 [32]. A resistencia fenotípica detectouse en poboacións salvaxes de flebótomos prateados en áreas onde se utilizaron piretroides sintéticos durante moito tempo [18, 33, 34]. Detectouse unha mutación non sinónima (L1014F) en poboacións silvestres de mosca de area india que se asoció coa resistencia ao DDT, o que suxire que a resistencia aos piretroides xorde a nivel molecular, xa que tanto o DDT como o piretroide (alfa-cipermetrina) teñen como obxectivo o mesmo xene no sistema nervioso do insecto [17, 34]. Polo tanto, a avaliación sistemática da susceptibilidade á cipermetrina e o seguimento da resistencia dos mosquitos son esenciais durante os períodos de erradicación e posterior á erradicación.
Unha limitación potencial deste estudo é que utilizamos o bioensaio do vial CDC para medir a susceptibilidade, pero todas as comparacións utilizaron resultados de estudos anteriores utilizando o kit de bioensaio da OMS. Os resultados dos dous bioensaios poden non ser directamente comparables porque o bioensaio do vial CDC mide a caída ao final do período de diagnóstico, mentres que o kit da OMS mide a mortalidade ás 24 ou 72 horas despois da exposición (esta última para compostos de acción lenta) [35]. Outra limitación potencial é o número de vilas do IRS neste estudo en comparación con unha non IRS e unha non IRS/antiga IRS. Non podemos supoñer que o nivel de susceptibilidade dos vectores de mosquitos observado en aldeas individuais dun distrito sexa representativo do nivel de susceptibilidade noutras aldeas e distritos de Bihar. A medida que a India entra na fase posterior á eliminación do virus da leucemia, é imperativo evitar o desenvolvemento significativo de resistencia. Requírese un seguimento rápido da resistencia en poboacións de flebótomos de diferentes distritos, bloques e áreas xeográficas. Os datos presentados neste estudo son preliminares e deben verificarse mediante a comparación coas concentracións de identificación publicadas pola Organización Mundial da Saúde [35] para ter unha idea máis específica do estado de susceptibilidade de P. argentipes nestas áreas antes de modificar os programas de control de vectores para manter baixas poboacións de flebótomos e apoiar a eliminación do virus da leucemia.
O mosquito P. argentipes, o vector do virus da leucose, pode comezar a mostrar os primeiros signos de resistencia á cipermetrina altamente eficaz. É necesario un seguimento regular da resistencia aos insecticidas en poboacións silvestres de P. argentipes para manter o impacto epidemiolóxico das intervencións de control de vectores. A rotación de insecticidas con diferentes modos de acción e/ou avaliación e rexistro de novos insecticidas é necesaria e recomendada para xestionar a resistencia aos insecticidas e apoiar a eliminación do virus da leucose na India.
Hora de publicación: 17-feb-2025